Средство для повышения потенции: Сайт временно не работает.

Россия, Беларусь, Казахстан, Киргизия, Молдова, Узбекистан, Украина, Эстония, Латвия, Литва, Болгария, Венгрия, Германия, Греция, Испания, Италия, Кипр, Португалия, Румыния, Франция, Хорватия, Чехия, Швейцария, Азербайджан , Армения ,Турция, Австрия, Сербия, Словакия, Словения, Польша

С юности комплексовал по поводу маленького члена. Девственности лишился только в 18, и то, пришлось вынести унизительный взгляд. Сейчас прохожу курс терапии. Всего за 2 недели он увеличился на несколько см! Для меня это шок и радость.

Член растет на глазах! Использовать ANT KING очень просто и абсолютно безопасно. Я многое перепробовал, помпы, крема, таблетки. Эффекта не было вообще. Продолжаю использовать капсулы. Устраивает на 100%!

Извиняюсь, не заметил на сайте сначала информацию про наложенный платеж. Тогда все в порядке точно, если оплата при получении. Пойду, оформлю себе тоже заказ.

Повышение активности миРНК посредством химических модификаций нуклеотидных оснований на 5′-конце направляющей цепи миРНК

. 2021 фев; 27 (2): 163-173.

doi: 10.1261/РНК.073783.119. Epub 2020 11 ноября.

Фумикадзу Шинохара ^{1 2 3} , Тайдзи Оаши ¹ , Тосимаса Харумото ¹ , Томоюки Нишикава ¹ , Юки Такаяма ¹ , Хикару Мияги ¹ , Юичи Такахаши ¹ , Такахиро Накадзима ¹ , Такаши Савада ¹ , Ясуо Кода ¹ , Асана Макино ¹

Принадлежности

• ¹ Научно-исследовательский отдел, отдел исследований и разработок, Kyowa Kirin Co.
  Ltd., Тиёда-ку, Токио 100-0004, Япония.
• ² Лаборатория функций РНК, Институт количественных биологических наук, Токийский университет, Бункё-ку, Токио 113-0032, Япония.
• ³ Кафедра вычислительной биологии и медицинских наук Высшей школы передовых наук Токийского университета, Бункё-ку, Токио 113-0032, Япония.

• PMID: 33177188
• PMCID: PMC7812868
• DOI: 10.1261/РНК.073783.119

Бесплатная статья ЧВК

Фумиказу Шинохара и др. РНК. 2021 9 фев.0003

Бесплатная статья ЧВК

. 2021 фев; 27 (2): 163-173.

doi: 10.1261/РНК.073783.119. Epub 2020 11 ноября.

Авторы

Фумикадзу Шинохара ^{1 2 3} , Тайдзи Оаши ¹ , Тосимаса Харумото ¹ , Томоюки Нишикава ¹ , Юки Такаяма ¹ , Хикару Мияги ¹ , Юичи Такахаши ¹

Принадлежности

• ¹ Научно-исследовательский отдел, отдел исследований и разработок, Kyowa Kirin Co. Ltd., Тиёда-ку, Токио 100-0004, Япония.
• ² Лаборатория функций РНК, Институт количественных биологических наук, Токийский университет, Бункё-ку, Токио 113-0032, Япония.
• ³ Кафедра вычислительной биологии и медицинских наук Высшей школы передовых наук Токийского университета, Бункё-ку, Токио 113-0032, Япония.

• PMID: 33177188
• PMCID: PMC7812868
• DOI: 10.1261/РНК.073783.119

Абстрактный

Малые интерферирующие РНК (миРНК) можно использовать не только в качестве функциональных инструментов биологических исследований, но и в качестве терапевтических агентов.

Ключевые слова: Аргонавт; РИСК; молчание РНК; химическая модификация; Доставка наркотиков; миРНК.

© 2021 Шинохара и др.; Опубликовано издательством Cold Spring Harbour Laboratory Press для Общества РНК.

Цифры

РИСУНОК 1.

Высоковероятностный анализ изоповерхностей in silico…

РИСУНОК 1.

Анализ высоковероятных изоповерхностей in silico акцептора водородной связи (красная сетка), водород…

Анализ высоковероятных изоповерхностей in silico акцептора водородной связи (красная сетка), донора водородной связи (синяя сетка) и гидрофобного фрагмента (зеленая сетка). ( A ) Карман для крепления AMP. ( B ) Карман для крепления UMP. ( C ) Карман для креплений AMP показан с проволочными каркасами. ( D ) Карман для вязки UMP показан с проволочными каркасами. Для визуализации изоповерхностей было реализовано отсечение энергии взаимодействия с AGO2 на уровне -1,5 ккал/моль. Все расчеты проводились в апо-форме. AMP и UMP показаны для иллюстрации их соответствующих сайтов связывания в карманах. АМП и УМЗ представлены в виде шаростержневой модели (водород — белый, углерод — цвет морской волны, азот — темно-синий, кислород — красный, фосфор — охра). Молекулярная поверхность AGO2 показана белым цветом. Рисунки были подготовлены с использованием программы молекулярной графики VMD (Humphrey et al. 19).96).

РИСУНОК 2.

Кристаллические структуры комплекса…

РИСУНОК 2.

Кристаллические структуры комплекса между доменом MID AGO2 человека и модифицированным нуклеозидом…

Кристаллические структуры комплекса между доменом MID AGO2 человека и модифицированными нуклеозидмонофосфатами. ( A ) Электронная плотность 8-Br AMP и его взаимодействие с Ago2-MID (идентификатор PDB: 7D7U). Молекула 8-Br AMP показана в виде шаростержневой модели с атомами углерода в золоте. Структура основной цепи Ago2-MID показана в виде ленточной модели, в то время как аминокислотные остатки и молекулы воды, включенные во взаимодействия, показаны в виде простых моделей палочек и красных шаров соответственно. Водородные связи обозначены розовыми пунктирными линиями, а карта электронной плотности без лиганда F _o − F _c на уровне 3,0 σ представлена ​​зеленой сеткой. ( B ) Наложенный AMP в комплексе AGO2-MID/8-Br AMP. Молекулы 8-Br AMP и AMP показаны в виде шарико-стержневых моделей с атомами углерода, выделенными золотым и бледно-зеленым цветом соответственно. Белковая структура комплекса AGO2-MID/8-Br AMP представлена ​​в виде ленточной модели. ( C ) Химическая структура 6-mCEPh-пурина. ( D ) Электронная плотность 6-mCEPh-пурина и его взаимодействие с AGO2-MID (идентификатор PDB: 7C6B). Молекула 6-mCEPh-пурина показана в виде шаростержневой модели с атомами углерода зеленоватого цвета. Структура основной цепи AGO2-MID показана в виде ленточной модели, тогда как аминокислотные остатки и молекулы воды, включенные во взаимодействия, представлены в виде простых моделей палочек и красных шаров соответственно. Водородные связи обозначены розовыми пунктирными линиями, а лиганд F 9 опущен.0205 o − F _c карта электронной плотности на уровне 3.0 σ представлена ​​зеленой сеткой.

РИСУНОК 3.

Одновременная установка для определения…

РИСУНОК 3.

Одновременная подгонка для определения константы диссоциации. Химический сдвиг при титровании нуклеотидов…

Одновременная подгонка для определения константы диссоциации. Химический сдвиг при титровании нуклеотидов ( A ) AMP, ( B ) 8-Br AMP и ( C ) 6-mCEPh-пурина. Профили хребта ¹ HN/ ¹⁵ Различия химического сдвига N (Δ _H/N ). Для определения K _d были выбраны следующие сигналы: (1) изолированные от других сигналов при каждом титровании и (2) CSP > 20 Гц (показано). Для одновременной подгонки использовали шестнадцать сигналов ( правый край , ×200 означает неназначенный сигнал; одна буква обозначает аминокислоту).

РИСУНОК 4.

Модификация 6-mCEPh-пурина усиливает siRNA…

РИСУНОК 4.

Модификация 6-mCEPh-пурина усиливает активность миРНК. ( A ) Последовательность Люка. ( Б…

Модификация 6-mCEPh-пурина усиливает активность siРНК. ( A ) Последовательность Люка. ( B ) Последовательность Luc1. Сравнение РНК-активности миРНК, нацеленных на люциферазу, каждая из которых несет A или 6-mCEPh-пурин на 5′-конце направляющей цепи. Относительные уровни свечения люциферазы в клетках HeLa, экспрессирующих люциферазу, после обработки различными концентрациями трансфицированной siRNA. Данные представлены в виде средних значений ± SD, n = 5, 6-mCEPh-пурин 9Значение 0175 P рассчитывали путем сравнения с 5′-А. P -значение (a) Двухфакторный дисперсионный анализ, ( ^### ) P < 0,001 (b): непарный t -тест. ( C ) Число копий Ago2-ассоциированной направляющей цепи 5′-A и 5′-6-mCEPh-пуриновых siРНК. Количество RISC-нагруженной направляющей цепи определяли с помощью иммунопреципитации AGO2 из клеток HeLa и qRT-PCR. siРНК трансфицировали в клетки в концентрациях 5 мкМ и 50 мкМ. Копии направляющих нитей рассчитывали на клеточный лизат. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 3. Значение 6-mCEPh-пурина P рассчитывали путем сравнения с 5′-A. P < 0,001 (a): Двуфакторный дисперсионный анализ, ( ^### ) P < 0,001 (b), ( ^## ) P = 0,009 (b): непарный 6 — t тест. ( D ) Динамика количества копий направляющей нити, связанной с Ago2. Число копий Ago2-ассоциированной направляющей цепи 5′-A и 5′-6-mCEPh-пуриновой миРНК определяли через 1, 2 и 3 дня после обработки 50 пМ миРНК. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, н = 6.

РИСУНОК 5.

siRNA активность 5′-A, 5′-6-mCEPH-пурина,…

РИСУНОК 5.

siRNA активность 5′-A, 5′-6-mCEPh-пурина и 5′-6-PBuS-пурина siRNA ( A ) Химическая структура…

РИСУНОК 5.

активность миРНК 5′-A, 5′-6-mCEPh-пурина и 5′-6-PBuS-пурина siРНК ( A ) Химическая структура 6-PBuS-пурина. ( B ) Сравнение РНК-активности миРНК, нацеленных на люциферазу, каждая из которых несет A, 6-mCEPh-пурин или 5′-6-PBuS-пурин на 5′-конце направляющей цепи. Относительные уровни свечения люциферазы в клетках HeLa, экспрессирующих люциферазу, после обработки различными концентрациями трансфицированной siRNA. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 5. Значение 6-mCEPh-пурина P рассчитывали путем сравнения с 5′-A. P -значение (a) Двухфакторный дисперсионный анализ, ( ^## ) P < 0,05 (b), ( ^### ) P < 0,001 (b): непарный t- тест . ( C ) Нокдаун активности миРНК, нацеленных на ApoB, с аденином, 6-mCEPh-пурином и 6-PBuS-пурином на 5′-конце направляющей цепи. Относительные уровни мРНК ApoB в первичных клетках мыши после обработки различными концентрациями трансфицированной siRNA. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 5; P = 0,001 (а): двухфакторный дисперсионный анализ; ( ^## ) P < 0,05 (b), ( ^### ) P < 0,001 (b): однофакторный дисперсионный анализ; (*) P < 0,05, (**) P < 0,01: непарный t -критерий и поправка Бонферрони.

РИСУНОК 6.

Нокдаун-активность миРНК, нацеленных на ApoB…

РИСУНОК 6.

Нокдаун-активность миРНК, нацеленных на ApoB, в печени мыши через 48 ч ( А…

РИСУНОК 6.

Нокдаун-активность миРНК, нацеленных на ApoB, в печени мыши через 48 ч ( A ) и 168 ч ( B ) с аденином, 6-mCEPh-пурином или 6-PBuS-пурином на 5′-конце направляющая прядь. ( C ) Значения IC ₅₀ (mpk), полученные при лечении мышей 5′-модифицированными siРНК, определенные через 48 часов ( A ) и 168 часов ( B ) после введения. ( D ) Общий холестерин в плазме мыши после введения различных концентраций LNP/миРНК. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 3. P = 0,001 (a): Двухфакторный дисперсионный анализ, (b): Однофакторный дисперсионный анализ, (*) P < 0,05, (**) P < 0,01: непарный t- test_Поправка Бонферрони.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

• Механистический анализ повышенной активности РНКи под действием 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи миРНК.

  Бречин В., Шинохара Ф., Сайто Д.И., Сейтц Х., Томари Ю. Бречин В. и др. РНК. 2021 фев; 27(2):151-162. doi: 10.1261/РНК.073775.119. Epub 2020 11 ноября. РНК. 2021. PMID: 33177187 Бесплатная статья ЧВК.

• Исследование селективного взаимодействия SNA-модифицированной siRNA с AGO2-MID.

  Камия Ю., Такеяма Ю., Мизуно Т., Сато Ф., Асанума Х. Камия Ю. и др. Int J Mol Sci. 2020 23 июля; 21 (15): 5218. дои: 10.3390/ijms21155218. Int J Mol Sci. 2020. PMID: 32717920 Бесплатная статья ЧВК.

• Расщепление пассажирской нити облегчает сборку siRNA в Ago2-содержащие ферментные комплексы RNAi.

  Матранга С., Томари Ю., Шин С., Бартел Д.П., Заморе Д. П. Матранга С. и др. Клетка. 2005 18 ноября; 123 (4): 607-20. doi: 10.1016/j.cell.2005.08.044. Epub 2005 3 ноября. Клетка. 2005. PMID: 16271386

• [Прогресс механизма интерференции РНК].

  Ян Ф, Ченг ЗМ. Ян Ф. и др. Йи Чуань. 2005 янв; 27(1):167-72. Йи Чуань. 2005. PMID: 15730978 Обзор. Китайский язык.

• Жизнь RISC: образование, действие и деградация РНК-индуцированного комплекса молчания.

  Ивакава Х.О., Томари Ю. Ивакава Х.О. и др. Мол Ячейка. 2022 6 января; 82 (1): 30-43. doi: 10.1016/j.molcel.2021.11.026. Epub 2021 22 декабря. Мол Ячейка. 2022. PMID: 34942118 Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

• Доклинические и клинические применения малых интерферирующих РНК (миРНК) и систем совместной доставки для терапии рака поджелудочной железы.

  Мирзаи С., Голами М.Х., Анг Х.Л., Хашеми Ф., Зарраби А., Заболян А., Хушманди К., Дельфи М., Хан Х., Ашрафизаде М., Сети Г., Кумар А.П. Мирзаи С. и др. Клетки. 2021 29 ноября; 10 (12): 3348. doi: 10.3390/ячейки10123348. Клетки. 2021. PMID: 34943856 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

• Механистический анализ повышенной активности РНКи под действием 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи миРНК.

  Бречин В., Шинохара Ф., Сайто Д.И., Сейтц Х., Томари Ю. Бречин В. и др. РНК. 2021 фев; 27(2):151-162. doi: 10.1261/РНК.073775.119. Epub 2020 11 ноября. РНК. 2021. PMID: 33177187 Бесплатная статья ЧВК.

Рекомендации

1. 1. Адамс Д., Гонсалес-Дуарте А. , О’Риордан В.Д., Ян К.С., Уэда М., Кристен А.В., Турнев И., Шмидт Х.Х., Коэльо Т., Берк Д.Л. и др. 2018. Patisiran, терапевтическое средство РНКи, для лечения наследственного транстиретинового амилоидоза. N Engl J Med 379: 11–21. 10.1056/NEJMoa1716153 — DOI — пабмед
2. 1. Amarzguioui M, Prydz H. 2004. Алгоритм выбора функциональных последовательностей миРНК. Biochem Biophys Res Commun 316: 1050–1058. 10.1016/j.bbrc.2004.02.157 — DOI — пабмед
3. 1. Бречин В. , Шинохара Ф., Сайто Дж., Зейтц Х., Томари Ю. 2021. Механистический анализ повышенной активности РНКи с помощью 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи миРНК. РНК 27: 151–162 (данный выпуск). 10.1261/РНК.073775.119 — DOI — ЧВК — пабмед
4. 1. Чиу Ю, Рана ТМ. 2003. Функция siRNA в RNAi: анализ химической модификации. РНК 9: 1034–1048. 10.1261/РНК.5103703 — DOI — ЧВК — пабмед
5. 1. Коулз А. Х., Туранов А.А., Годиньо BMDC, Эчеверрия Д., Альтерман Дж.Ф., Ру Л., Харасти Р.А., Хворова А., Аронин Н. 2017. 5′-винилфосфонат улучшает накопление в тканях и эффективность конъюгированных миРНК in vivo. Рез. нуклеиновых кислот 45: 7581–7592. 10.1093/нар/gkx507 — DOI — ЧВК — пабмед

Типы публикаций

термины MeSH

• 21
• 21

вещества

Повышение эффективности миРНК за счет химических модификаций нуклеотидных оснований на 5′-конце направляющей цепи миРНК

1. org/Person»> Фумикадзу Шинохара1,
2. Тайдзи Оаши1,
3. Тошимаса Харумото1,
4. Томоюки Нисикава1,
5. Юки Такаяма1,
6. Хикару Мияги1,
7. Юичи Такахаси1,
8. org/Person»> Такахиро Накаджима1,
9. Такаши Савада1,
10. Ясуо Кода1,
11. Асана Макино1,
12. Ацуко Сато1,
13. Каори Хамагуч2,
14. Мичихико Судзуки1,
15. org/Person»> Дзюнъитиро Ямамото1,
16. Юкихиде Томари2 и
17. Джун-Ичи Сайто1,3

1. ¹ Кайова Кирин Ко., Лтд.;
2. ² Токийский университет

1. ↵* Соответствующий автор; электронная почта: jun.saito.su{at}kyowakirin.com

Abstract

Малые интерферирующие РНК (миРНК) можно использовать не только в качестве функциональных инструментов биологических исследований, но и в качестве терапевтических агентов. Для клинического применения миРНК в качестве лекарств использовались различные химические модификации для повышения активности миРНК. ожидается, что лекарственные препараты и дальнейшие химические модификации улучшат применение siРНК-терапевтических средств. Как 5′ азотистое основание направляющей цепи влияет на взаимодействие между siRNA и AGO2 и на активность расщепления мишени, структурную оптимизацию этого конкретного положения может быть полезной стратегией для улучшения активности siRNA. Здесь, используя in silico модель комплекса между доменом MID AGO2 человека и нуклеозидмонофосфатами мы провели скрининг и синтезировали оригинальный аналог, производный от аденина, 6-(3-(2-карбоксиэтил)фенил)пурин (6-mCEPh-пурин), который лучше, чем природные нуклеотидные основания, вписывается в домен MID. из АГО2. Введение аналога 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи миРНК значительно усиливало действие мишени. нокдаун-активность как в культивируемых клеточных линиях, так и в животных моделях in vivo. Наши выводы могут помочь расширить стратегии рационального оптимизация активности миРНК посредством химических модификаций нуклеотидных оснований.

• Аргонавт
• РИСК
• Сайленсинг РНК
• химическая модификация
• миРНК

• Поступила в редакцию 27.10.2019 г.
• Принято 5 ноября 2020 г.

Эта статья распространяется исключительно RNA Society в течение первых 12 месяцев после даты полной публикации (см. http://rnajournal.cshlp.org/site/misc/terms. xhtml). Через 12 месяцев он доступен по лицензии Creative Commons (Attribution-NonCommercial 4.0 International), как описано на http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/.

ПРИНЯТАЯ РУКОПИСЬ

Настоящая статья

1. Опубликовано заранее 11 ноября 2020 г., дои: 10.1261/РНК.073783.119 РНК 906:50 2020. Опубликовано издательством Cold Spring Harbour Laboratory Press для Общества РНК

   .