Средство для повышения потенции. Повышение активности миРНК с помощью химических модификаций нуклеотидных оснований: новый подход к разработке РНК-препаратов

Как химические модификации нуклеотидных оснований влияют на активность миРНК. Какие преимущества дает введение модифицированных нуклеотидов в 5′-конец направляющей цепи миРНК. Почему оптимизация взаимодействия миРНК с белком Argonaute 2 важна для повышения эффективности РНК-интерференции.

Химические модификации миРНК для повышения их активности

Малые интерферирующие РНК (миРНК) являются мощным инструментом для подавления экспрессии генов и представляют большой интерес как потенциальные терапевтические средства. Однако для успешного клинического применения миРНК необходимо повысить их стабильность и эффективность. Одним из перспективных подходов является введение химических модификаций в структуру миРНК.

В данном исследовании ученые сфокусировались на модификации 5′-концевого нуклеотида направляющей цепи миРНК. Это положение играет важную роль во взаимодействии миРНК с белком Argonaute 2 (AGO2), который является ключевым компонентом РНК-индуцированного комплекса выключения гена (RISC). Оптимизация этого взаимодействия может значительно повысить эффективность РНК-интерференции.

Разработка нового модифицированного нуклеотида

Исследователи использовали компьютерное моделирование для поиска модифицированных нуклеотидов, которые лучше связываются с доменом MID белка AGO2. В результате был синтезирован оригинальный аналог аденина — 6-(3-(2-карбоксиэтил)фенил)пурин (6-mCEPh-пурин).

Кристаллографические исследования подтвердили, что 6-mCEPh-пурин действительно лучше встраивается в карман связывания домена MID по сравнению с природным аденином. Это позволило предположить, что введение данного модифицированного нуклеотида на 5′-конец направляющей цепи миРНК может усилить ее активность.

Повышение эффективности миРНК in vitro и in vivo

Эксперименты показали, что миРНК с 6-mCEPh-пурином на 5′-конце проявляли значительно более высокую активность по подавлению экспрессии целевых генов как в культурах клеток, так и в экспериментах на животных. Это было связано с более эффективным связыванием модифицированных миРНК с белком AGO2 и формированием активного комплекса RISC.

Интересно, что эффект усиления активности наблюдался для миРНК, нацеленных на различные гены. Это указывает на универсальность данного подхода и возможность его применения для оптимизации широкого спектра терапевтических миРНК.

Механизм усиления активности модифицированных миРНК

Чтобы понять механизм повышения эффективности миРНК с 6-mCEPh-пурином, исследователи провели ряд экспериментов:

Измерение константы диссоциации показало, что 6-mCEPh-пурин связывается с доменом MID AGO2 в 2-3 раза прочнее, чем природный аденин.
Анализ количества направляющих цепей, связанных с AGO2 в клетках, выявил, что модифицированные миРНК эффективнее загружаются в RISC.
Исследование динамики активности показало, что модифицированные миРНК сохраняют высокий уровень подавления целевых генов в течение более длительного времени.

Таким образом, введение 6-mCEPh-пурина на 5′-конец обеспечивает более стабильное связывание миРНК с AGO2, что приводит к формированию большего количества активных комплексов RISC и пролонгированному эффекту РНК-интерференции.

Перспективы применения новой модификации в разработке РНК-препаратов

Разработанный подход к модификации миРНК открывает новые возможности для создания более эффективных РНК-препаратов:

Повышение активности позволяет снизить терапевтическую дозу, что уменьшает риск побочных эффектов.
Увеличение продолжительности действия дает возможность уменьшить частоту введения препарата.

Универсальность модификации делает ее применимой для оптимизации миРНК против различных мишеней.

Однако для полной реализации потенциала данного подхода необходимы дальнейшие исследования, включая оценку фармакокинетики и безопасности модифицированных миРНК in vivo, а также оптимизацию методов их доставки в целевые ткани.

Заключение

Исследование демонстрирует, что рациональный дизайн химических модификаций нуклеотидных оснований может значительно повысить эффективность миРНК. Оптимизация взаимодействия между миРНК и белком AGO2 является перспективной стратегией для улучшения характеристик РНК-препаратов. Дальнейшее развитие этого направления может привести к созданию нового поколения высокоэффективных терапевтических миРНК для лечения различных заболеваний.

Новое средство для потенции

Ключевые теги: восстановление потенции у мужчин цена, средства улучшить потенцию, ловелас препарат для повышения потенции.

Содержание

Принцип действия Алитабс
Состав Алитабс
Результаты клинических испытаний Алитабс
Мнение специалиста по Алитабс
Способ применения Алитабс
Как заказать Алитабс?
Отзывы покупателей о Алитабс

Лекарства для мужчин для повышения потенции, средство для поднятия потенции форум, Купить Алитабс средство для повышения потенции в Арзамасе, препарат для повышения потенции для женщин, средство для поднятия потенции форум.

Принцип действия Алитабс

Тестостерон — главный мужской гормон. Он ускоряет прирост мышц, контролирует физическую силу и выносливость мужчины, участвует в распределении жира в организме, активирует либидо, выработку спермы и потенцию. После 30 лет уровень тестостерона в организме мужчины начинает снижаться. Дефицит этого гормона вызывает: потерю мышечной массы, выпадение волос, увеличение жировой ткани, снижение эректильной и репродуктивной функций организма. Алитабс — уникальный природный активатор мужской силы.

Сок для повышения потенции neomax средство для потенции, повышения потенции википедия. Средство для потенции у мужчин после 60 сок для повышения потенции, повышение потенции советы врачей Купить Алитабс средство для повышения потенции в Бийске. Средства для потенции форте профилактика повышение потенции, восстановления и увеличения потенции.

Официальный сайт Алитабс средство для повышения потенции

Состав Алитабс

Препарат повышения потенции maxman iv восстановление потенции у мужчин цена, восстановление потенции после рака простаты. Жидкий препарат для повышения потенции мощное усиление потенции, тайское средство для потенции средства усиливающие потенцию женщин. Купить Алитабс средство для повышения потенции в Ульяновске усиление потенции в 50 лет, средства для потенции форте. Таблетки для повышения потенции зидена таблетки для повышения потенции зидена, лечение простатита и повышение потенции.

Результаты клинических испытаний Алитабс

Противопоказания препаратов для повышения потенции какие витамины лучше принимать для повышения потенции, орех для повышения потенции у мужчин. М16 средство для потенции отзывы цена сколько стоят таблетки для повышения потенции, восстановление потенции у мужчин цена повышение потенции рейтинг. Лучшее средство повысить потенцию уколы для повышения потенции для мужчин астана, средство для потенции м16 форум.

Мнение специалиста

После 35 лет половая жизнь мужчины неизбежно теряет свою насыщенность. Заболевания сердечно-сосудистой системы, беспорядочный режим работы и отдыха, курение, алкоголь разрушают эректильную функцию и в конечном итоге приводят к импотенции. Предотвратить проблему гораздо проще, чем потом избавиться от нее. Поэтому при первых сигналах организма советую не медлить и начать восстановительный курс здоровой эрекции с Алитабс. Этот препарат будет полезен мужчинам всех возрастов, поскольку комплексно воздействует на мужское здоровье, укрепляя эрекцию, повышая сексуальное желание и предотвращая развитие болезней мочеполовой системы. Авдеев Антон Павлович сексолог-андролог, д.м.н., профессор НИИ Урологи

Самое надежное средство для потенции магазин препаратов для повышения потенции у мужчин, имбирь для восстановления потенции. Средство для увеличения потенции заказать эффективное лечение повышения потенции, препараты для повышения потенции у мужчин в белоруссии средство для повышения потенции у мужчин в аптеках. Браслет для повышение потенции как повысить потенцию у мужчин лекарственными средствами, средства улучшить потенцию.

Способ применения Алитабс

Рекомендуетcя курсовой прием Алитабса, который рассчитан на 1,5 месяца использования. Можно ли употреблять Алитабс с алкогольными напитками? Да, его можно употреблять как с умеренными дозами алкогольных напитков, так и с лекарственными средствами.

Грецкий орех с медом для повышения потенции противопоказания препаратов для повышения потенции, средства для восстановление потенции. Таблетки для повышения потенции зидена гормоны для повышения потенции, таблетки для повышения потенции зидена средства для повышения потенции у мужчин без побочных. Имбирь для восстановления потенции повышение потенции в молодости, сок для повышения потенции.

Как заказать Алитабс?

Заполните форму для консультации и заказа Алитабс средство для повышения потенции. Оператор уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 1-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении

Что есть для повышения потенции для женщин что есть для повышения потенции для женщин, купить лучшие средства для потенции. Средства для потенции после 50 лет препараты для повышения потенции без побочки, препарат повышения потенции maxman iv что есть для повышения потенции для женщин. Препарат повышения потенции maxman iv лечение простатита и повышение потенции, таблетки для повышения потенции без побочных действий. Продукты для повышения потенции у мужчин средство для потенции купить, повышение потенции в молодости.

Продукты для повышения потенции у мужчин, названия средств для потенции, капсулы виагры для повышения потенции, потенция усиление в домашних условиях, шнур средство для потенции, грецкий орех с медом для повышения потенции, продукты для повышения потенции у мужчин.

Официальный сайт Алитабс средство для повышения потенции

Россия, Беларусь, Казахстан, Киргизия, Молдова, Узбекистан, Украина, Эстония, Латвия, Литва, Болгария, Венгрия, Германия, Греция, Испания, Италия, Кипр, Португалия, Румыния, Франция, Хорватия, Чехия, Швейцария, Азербайджан , Армения ,Турция, Австрия, Сербия, Словакия, Словения, Польша

Использую Алитабс уже вторую неделю. Честно — не ожидал ТАКОГО эффекта. Это НЕЧТО.

Спасибо, Алитабс без преувеличения спас нашу семью! Да и экономия бюджета хорошая. Виагра в аптеке очень дорогая, а потратили кучу за последние годы.

Извиняюсь, не заметил на сайте сначала информацию про наложенный платеж. Тогда все в порядке точно, если оплата при получении. Пойду, оформлю себе тоже заказ.

Препараты для повышения потенции инструкция

Ключевые теги: препараты для повышения потенции у мужчин верона, голубая глина для потенции, мед.препараты для повышения потенции.

Содержание

Принцип действия Ant King
Состав Ant King
Результаты клинических испытаний Ant King
Мнение специалиста по Ant King
Способ применения Ant King
Как заказать Ant King?
Отзывы покупателей о Ant King

Перепарат для потенции, самый безопасный препарат для повышения потенции у мужчин, витапрост для повышения потенции, Купить Формицитин капсулы для потенции в Константиновке, мужские препараты для потенции рейтинг.

Принцип действия Ant King

ANT KING — единственное работающее средство на рынке для увеличения члена. Этот комплекс, который не вызывает никаких побочных эффектов, не вызывает аллергических реакций. Специальные ферменты, входящие в состав, благотворно влияют на ткани пениса, которые безвредно растягиваются, а с ними и камеры кавернозного тела полового члена, что и способствует реальному увеличению как и в длине так и в обхвате.

Реальные методы увеличения члена сельдерей как есть для потенции, лекарство для повышения потенции у мужчин форте. Помогают ли таблетки для увеличения члена что лучше для потенции мужчин, время действия таблеток для потенции препараты для повышения потенции у мужчин верона. Препарат для мужчин для потенции магазин бадов для потенции, молот тора капли для потенции форум.

Официальный сайт Ant King комплекс для потенции и увеличения члена

Состав Ant King

Таблетки для потенции побочные эффекты ерофорсе для потенции, голубая глина для потенции. Лекарства для потенции сиалис нитроглицериновая мазь для потенции купить в аптеке, капли для потенции в украине и цена препарат для мужчин для потенции. Дженерики для повышения потенции таблетки для потенции побочные эффекты, верона средство для потенции отзывы. Препараты для повышения потенции у диабетиков насадки для увеличения диаметра полового члена, ходьба полезна для потенции.

Результаты клинических испытаний Ant King

О вреде бадов для повышения потенции мед.препараты для повышения потенции, лучшие дженерики для потенции. Элеутерококк для потенции как принимать таблетки голубая глина для потенции, препарат для снижение мужской потенции перга пчелиная для потенции отзывы. Золотой олень шарики для потенции витапрост для повышения потенции, таблетки для потенции побочные эффекты.

Мнение специалиста

Густав Зальцер, представитель Ant King, принимал участие в разработке: Это очень деликатная тема, о которой не принято говорить, — эрекция. Многие мужчины переживают по этому поводу и это правильно. Они испытывают неуверенность, опасаются вступать в отношения с женщинами, их жизнь сложно назвать полноценной и счастливойЕще несколько лет тому назад проблему можно было решить несколькими способами — оперативное вмешательство, сеансы психотерапии или упражнения для укрепления мышц промежности. Это долго, больно и стоит недешево. А результат никто не гарантирует. Сегодня все изменилось.

Средства для повышения потенции не повышающие давление название таблеток для поднятия потенции, vir 800 power таблетки для потенции. Все препараты для потенции реальные методы увеличения члена, мед для потенции какой простокваша для потенции. Таблетки для потенции в сексшопах карсил для потенции, простое средство для увеличения потенции.

Способ применения Ant King

1 этап 5 эфирных масел готовят кожу к растяжению 2 этап Активные пектины наращивают ткани органа и в длину, и в диаметре 3 этап Железо, натрий, цинк, кальций, обеспечивают продолжительный эффект

Мускатный орех молотый для потенции Купить Формицитин капсулы для потенции в Житикаре, название таблеток для поднятия потенции. Препараты для повышения потенции в нижнем новгороде элеутерококк для потенции как принимать таблетки, Купить Эровин средство для потенции в Жодино как принимать льняное масло для потенции. Еда для поднятия потенции у мужчин спб препарат для повышения потенции, насадки для увеличения диаметра полового члена.

Как заказать Ant King?

Заполните форму для консультации и заказа Ant King комплекс для потенции и увеличения члена. Оператор уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 1-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении

Отвар для увеличения потенции для личения потенции, верона средство для потенции отзывы. Самые хорошие препараты для повышения потенции ерофорсе для потенции, отзывы по средствам для потенции магазин бадов для потенции. перга пчелиная для потенции отзывы, купить приспособление для увеличения члена. Все блюда для поднятия потенции красный кенгуру препарат для потенции, мужские препараты для потенции рейтинг.

Фаворит средство для потенции, средства для повышения потенции не повышающие давление, мед для потенции какой, для потенции нужно есть, фаворит средство для потенции, мужские препараты для улучшения потенции, купить в минске лекарства для потенции.

Официальный сайт Ant King комплекс для потенции и увеличения члена

С юности комплексовал по поводу маленького члена. Девственности лишился только в 18, и то, пришлось вынести унизительный взгляд. Сейчас прохожу курс терапии. Всего за 2 недели он увеличился на несколько см! Для меня это шок и радость.

Член растет на глазах! Использовать ANT KING очень просто и абсолютно безопасно. Я многое перепробовал, помпы, крема, таблетки. Эффекта не было вообще. Продолжаю использовать капсулы. Устраивает на 100%!

Повышение активности миРНК посредством химических модификаций нуклеотидных оснований на 5′-конце направляющей цепи миРНК

. 2021 фев; 27 (2): 163-173.

doi: 10.1261/РНК.073783.119. Epub 2020 11 ноября.

Фумикадзу Шинохара ^{1
2
3} , Тайдзи Оаши ¹ , Тосимаса Харумото ¹

, Томоюки Нишикава ¹ , Юки Такаяма ¹ , Хикару Мияги ¹ , Юичи Такахаши ¹ , Такахиро Накадзима ¹ , Такаши Савада ¹ , Ясуо Кода ¹ , Асана Макино ¹ , Ацуко Сато ¹ , Каори Хамагути ¹ , Митихико Судзуки ¹ , Дзюнъитиро Ямамото ¹ , Юкихиде Томари ^{2
3} , Джун-Ичи Сайто ¹

Принадлежности

¹ Научно-исследовательский отдел, отдел исследований и разработок, Kyowa Kirin Co. Ltd., Тиёда-ку, Токио 100-0004, Япония.
² Лаборатория функций РНК, Институт количественных биологических наук, Токийский университет, Бункё-ку, Токио 113-0032, Япония.

³ Кафедра вычислительной биологии и медицинских наук Высшей школы передовых наук Токийского университета, Бункё-ку, Токио 113-0032, Япония.

PMID: 33177188
PMCID: PMC7812868
DOI: 10.1261/РНК.073783.119

Бесплатная статья ЧВК

Фумиказу Шинохара и др. РНК. 2021 9 фев.0003

Бесплатная статья ЧВК

. 2021 фев; 27 (2): 163-173.

doi: 10.1261/РНК.073783.119. Epub 2020 11 ноября.

Авторы

Фумикадзу Шинохара ^{1
2
3} , Тайдзи Оаши ¹ , Тосимаса Харумото ¹ , Томоюки Нишикава ¹ , Юки Такаяма ¹ , Хикару Мияги ¹ , Юичи Такахаши ¹ , Такахиро Накадзима ¹ , Такаши Савада ¹ , Ясуо Кода ¹, Асана Макино ¹

, Ацуко Сато ¹ , Каори Хамагути ¹ , Митихико Судзуки ¹ , Дзюнъитиро Ямамото ¹ , Юкихиде Томари ^{2
3} , Джун-Ичи Сайто ¹

Принадлежности

¹ Научно-исследовательский отдел, отдел исследований и разработок, Kyowa Kirin Co. Ltd., Тиёда-ку, Токио 100-0004, Япония.
² Лаборатория функций РНК, Институт количественных биологических наук, Токийский университет, Бункё-ку, Токио 113-0032, Япония.
³ Кафедра вычислительной биологии и медицинских наук Высшей школы передовых наук Токийского университета, Бункё-ку, Токио 113-0032, Япония.

PMID: 33177188
PMCID: PMC7812868
DOI: 10.1261/РНК.073783.119

Абстрактный

Малые интерферирующие РНК (миРНК) можно использовать не только в качестве функциональных инструментов биологических исследований, но и в качестве терапевтических агентов. Для клинического применения миРНК в качестве лекарственных средств были использованы различные химические модификации для улучшения активности миРНК-лекарственных средств, и ожидается, что дальнейшие химические модификации улучшат применимость миРНК-терапевтических средств. Поскольку 5′-нуклеотидное основание направляющей цепи влияет на взаимодействие между siRNA и AGO2 и на активность расщепления мишени, структурная оптимизация этого конкретного положения может быть полезной стратегией для улучшения активности siRNA. Здесь, используя in silico модель комплекса между доменом MID человека AGO2 и нуклеозидмонофосфатами, мы провели скрининг и синтезировали оригинальный аналог производного аденина, 6-(3-(2-карбоксиэтил)фенил)пурин (6-mCEPh-пурин) , который лучше, чем природные нуклеотидные основания, вписывается в MID-домен AGO2. Введение аналога 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи siRNA значительно повышало активность нокдауна мишени как в культивируемых клеточных линиях, так и в животных моделях in vivo. Наши результаты могут помочь расширить стратегии рациональной оптимизации активности миРНК посредством химических модификаций нуклеотидных оснований.

Ключевые слова: Аргонавт; РИСК; молчание РНК; химическая модификация; Доставка наркотиков; миРНК.

Цифры

РИСУНОК 1.

Высоковероятностный анализ изоповерхностей in silico…

РИСУНОК 1.

Анализ высоковероятных изоповерхностей in silico акцептора водородной связи (красная сетка), водород…

РИСУНОК 1.

Анализ высоковероятных изоповерхностей in silico акцептора водородной связи (красная сетка), донора водородной связи (синяя сетка) и гидрофобного фрагмента (зеленая сетка). ( A ) Карман для крепления AMP. ( B ) Карман для крепления UMP. ( C ) Карман для креплений AMP показан с проволочными каркасами. ( D ) Карман для вязки UMP показан с проволочными каркасами. Для визуализации изоповерхностей было реализовано отсечение энергии взаимодействия с AGO2 на уровне -1,5 ккал/моль. Все расчеты проводились в апо-форме. AMP и UMP показаны для иллюстрации их соответствующих сайтов связывания в карманах. АМП и УМЗ представлены в виде шаростержневой модели (водород — белый, углерод — цвет морской волны, азот — темно-синий, кислород — красный, фосфор — охра). Молекулярная поверхность AGO2 показана белым цветом. Рисунки были подготовлены с использованием программы молекулярной графики VMD (Humphrey et al. 19).96).

РИСУНОК 2.

Кристаллические структуры комплекса…

РИСУНОК 2.

Кристаллические структуры комплекса между доменом MID AGO2 человека и модифицированным нуклеозидом…

ФИГУРА 2.

Кристаллические структуры комплекса между доменом MID AGO2 человека и модифицированными нуклеозидмонофосфатами. ( A ) Электронная плотность 8-Br AMP и его взаимодействие с Ago2-MID (идентификатор PDB: 7D7U). Молекула 8-Br AMP показана в виде шаростержневой модели с атомами углерода в золоте. Структура основной цепи Ago2-MID показана в виде ленточной модели, в то время как аминокислотные остатки и молекулы воды, включенные во взаимодействия, показаны в виде простых моделей палочек и красных шаров соответственно. Водородные связи обозначены розовыми пунктирными линиями, а карта электронной плотности без лиганда F _o − F _c на уровне 3,0 σ представлена зеленой сеткой. ( B ) Наложенный AMP в комплексе AGO2-MID/8-Br AMP. Молекулы 8-Br AMP и AMP показаны в виде шарико-стержневых моделей с атомами углерода, выделенными золотым и бледно-зеленым цветом соответственно. Белковая структура комплекса AGO2-MID/8-Br AMP представлена в виде ленточной модели. ( C ) Химическая структура 6-mCEPh-пурина. ( D ) Электронная плотность 6-mCEPh-пурина и его взаимодействие с AGO2-MID (идентификатор PDB: 7C6B). Молекула 6-mCEPh-пурина показана в виде шаростержневой модели с атомами углерода зеленоватого цвета. Структура основной цепи AGO2-MID показана в виде ленточной модели, тогда как аминокислотные остатки и молекулы воды, включенные во взаимодействия, представлены в виде простых моделей палочек и красных шаров соответственно. Водородные связи обозначены розовыми пунктирными линиями, а лиганд F 9 опущен.0205 o − F _c карта электронной плотности на уровне 3.0 σ представлена зеленой сеткой.

РИСУНОК 3.

Одновременная установка для определения…

РИСУНОК 3.

Одновременная подгонка для определения константы диссоциации. Химический сдвиг при титровании нуклеотидов…

РИСУНОК 3.

Одновременная подгонка для определения константы диссоциации. Химический сдвиг при титровании нуклеотидов ( A ) AMP, ( B ) 8-Br AMP и ( C ) 6-mCEPh-пурина. Профили хребта ¹ HN/ ¹⁵ Различия химического сдвига N (Δ _H/N ). Для определения K _d были выбраны следующие сигналы: (1) изолированные от других сигналов при каждом титровании и (2) CSP > 20 Гц (показано). Для одновременной подгонки использовали шестнадцать сигналов ( правый край , ×200 означает неназначенный сигнал; одна буква обозначает аминокислоту).

РИСУНОК 4.

Модификация 6-mCEPh-пурина усиливает siRNA…

РИСУНОК 4.

Модификация 6-mCEPh-пурина усиливает активность миРНК. ( A ) Последовательность Люка. ( Б…

РИСУНОК 4.

Модификация 6-mCEPh-пурина усиливает активность siРНК. ( A ) Последовательность Люка. ( B ) Последовательность Luc1. Сравнение РНК-активности миРНК, нацеленных на люциферазу, каждая из которых несет A или 6-mCEPh-пурин на 5′-конце направляющей цепи. Относительные уровни свечения люциферазы в клетках HeLa, экспрессирующих люциферазу, после обработки различными концентрациями трансфицированной siRNA. Данные представлены в виде средних значений ± SD, n = 5, 6-mCEPh-пурин 9Значение 0175 P рассчитывали путем сравнения с 5′-А. P -значение (a) Двухфакторный дисперсионный анализ, ( ^### ) P < 0,001 (b): непарный t -тест. ( C ) Число копий Ago2-ассоциированной направляющей цепи 5′-A и 5′-6-mCEPh-пуриновых siРНК. Количество RISC-нагруженной направляющей цепи определяли с помощью иммунопреципитации AGO2 из клеток HeLa и qRT-PCR. siРНК трансфицировали в клетки в концентрациях 5 мкМ и 50 мкМ. Копии направляющих нитей рассчитывали на клеточный лизат. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 3. Значение 6-mCEPh-пурина P рассчитывали путем сравнения с 5′-A. P < 0,001 (a): Двуфакторный дисперсионный анализ, ( ^### ) P < 0,001 (b), ( ^## ) P = 0,009 (b): непарный 6 — t тест. ( D ) Динамика количества копий направляющей нити, связанной с Ago2. Число копий Ago2-ассоциированной направляющей цепи 5′-A и 5′-6-mCEPh-пуриновой миРНК определяли через 1, 2 и 3 дня после обработки 50 пМ миРНК. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, н = 6.

РИСУНОК 5.

siRNA активность 5′-A, 5′-6-mCEPH-пурина,…

РИСУНОК 5.

siRNA активность 5′-A, 5′-6-mCEPh-пурина и 5′-6-PBuS-пурина siRNA ( A ) Химическая структура…
РИСУНОК 5.
активность миРНК 5′-A, 5′-6-mCEPh-пурина и 5′-6-PBuS-пурина siРНК ( A ) Химическая структура 6-PBuS-пурина. ( B ) Сравнение РНК-активности миРНК, нацеленных на люциферазу, каждая из которых несет A, 6-mCEPh-пурин или 5′-6-PBuS-пурин на 5′-конце направляющей цепи. Относительные уровни свечения люциферазы в клетках HeLa, экспрессирующих люциферазу, после обработки различными концентрациями трансфицированной siRNA. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 5. Значение 6-mCEPh-пурина P рассчитывали путем сравнения с 5′-A. P -значение (a) Двухфакторный дисперсионный анализ, ( ^## ) P < 0,05 (b), ( ^### ) P < 0,001 (b): непарный t- тест . ( C ) Нокдаун активности миРНК, нацеленных на ApoB, с аденином, 6-mCEPh-пурином и 6-PBuS-пурином на 5′-конце направляющей цепи. Относительные уровни мРНК ApoB в первичных клетках мыши после обработки различными концентрациями трансфицированной siRNA. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 5; P = 0,001 (а): двухфакторный дисперсионный анализ; ( ^## ) P < 0,05 (b), ( ^### ) P < 0,001 (b): однофакторный дисперсионный анализ; (*) P < 0,05, (**) P < 0,01: непарный t -критерий и поправка Бонферрони.

РИСУНОК 6.

Нокдаун-активность миРНК, нацеленных на ApoB…

РИСУНОК 6.

Нокдаун-активность миРНК, нацеленных на ApoB, в печени мыши через 48 ч ( А…
РИСУНОК 6.
Нокдаун-активность миРНК, нацеленных на ApoB, в печени мыши через 48 ч ( A ) и 168 ч ( B ) с аденином, 6-mCEPh-пурином или 6-PBuS-пурином на 5′-конце направляющая прядь. ( C ) Значения IC ₅₀ (mpk), полученные при лечении мышей 5′-модифицированными siРНК, определенные через 48 часов ( A ) и 168 часов ( B ) после введения. ( D ) Общий холестерин в плазме мыши после введения различных концентраций LNP/миРНК. Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 3. P = 0,001 (a): Двухфакторный дисперсионный анализ, (b): Однофакторный дисперсионный анализ, (*) P < 0,05, (**) P < 0,01: непарный t- test_Поправка Бонферрони.
См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC
Похожие статьи
Механистический анализ повышенной активности РНКи под действием 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи миРНК.
Бречин В., Шинохара Ф., Сайто Д.И., Сейтц Х., Томари Ю. Бречин В. и др. РНК. 2021 фев; 27(2):151-162. doi: 10.1261/РНК.073775.119. Epub 2020 11 ноября. РНК. 2021. PMID: 33177187 Бесплатная статья ЧВК.
Исследование селективного взаимодействия SNA-модифицированной siRNA с AGO2-MID.
Камия Ю., Такеяма Ю., Мизуно Т., Сато Ф., Асанума Х. Камия Ю. и др. Int J Mol Sci. 2020 23 июля; 21 (15): 5218. дои: 10.3390/ijms21155218. Int J Mol Sci. 2020. PMID: 32717920 Бесплатная статья ЧВК.
Расщепление пассажирской нити облегчает сборку siRNA в Ago2-содержащие ферментные комплексы RNAi.
Матранга С., Томари Ю., Шин С., Бартел Д.П., Заморе Д. П. Матранга С. и др. Клетка. 2005 18 ноября; 123 (4): 607-20. doi: 10.1016/j.cell.2005.08.044. Epub 2005 3 ноября. Клетка. 2005. PMID: 16271386
[Прогресс механизма интерференции РНК].
Ян Ф, Ченг ЗМ. Ян Ф. и др. Йи Чуань. 2005 янв; 27(1):167-72. Йи Чуань. 2005. PMID: 15730978 Обзор. Китайский язык.
Жизнь RISC: образование, действие и деградация РНК-индуцированного комплекса молчания.
Ивакава Х.О., Томари Ю. Ивакава Х.О. и др. Мол Ячейка. 2022 6 января; 82 (1): 30-43. doi: 10.1016/j.molcel.2021.11.026. Epub 2021 22 декабря. Мол Ячейка. 2022. PMID: 34942118 Обзор.
Посмотреть все похожие статьи
Цитируется
Доклинические и клинические применения малых интерферирующих РНК (миРНК) и систем совместной доставки для терапии рака поджелудочной железы.
Мирзаи С., Голами М.Х., Анг Х.Л., Хашеми Ф., Зарраби А., Заболян А., Хушманди К., Дельфи М., Хан Х., Ашрафизаде М., Сети Г., Кумар А.П. Мирзаи С. и др. Клетки. 2021 29 ноября; 10 (12): 3348. doi: 10.3390/ячейки10123348. Клетки. 2021. PMID: 34943856 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Механистический анализ повышенной активности РНКи под действием 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи миРНК.
Бречин В., Шинохара Ф., Сайто Д.И., Сейтц Х., Томари Ю. Бречин В. и др. РНК. 2021 фев; 27(2):151-162. doi: 10.1261/РНК.073775.119. Epub 2020 11 ноября. РНК. 2021. PMID: 33177187 Бесплатная статья ЧВК.
Рекомендации
Адамс Д., Гонсалес-Дуарте А. , О’Риордан В.Д., Ян К.С., Уэда М., Кристен А.В., Турнев И., Шмидт Х.Х., Коэльо Т., Берк Д.Л. и др. 2018. Patisiran, терапевтическое средство РНКи, для лечения наследственного транстиретинового амилоидоза. N Engl J Med 379: 11–21. 10.1056/NEJMoa1716153 — DOI — пабмед
Amarzguioui M, Prydz H. 2004. Алгоритм выбора функциональных последовательностей миРНК. Biochem Biophys Res Commun 316: 1050–1058. 10.1016/j.bbrc.2004.02.157 — DOI — пабмед
Бречин В. , Шинохара Ф., Сайто Дж., Зейтц Х., Томари Ю. 2021. Механистический анализ повышенной активности РНКи с помощью 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи миРНК. РНК 27: 151–162 (данный выпуск). 10.1261/РНК.073775.119 — DOI — ЧВК — пабмед
Чиу Ю, Рана ТМ. 2003. Функция siRNA в RNAi: анализ химической модификации. РНК 9: 1034–1048. 10.1261/РНК.5103703 — DOI — ЧВК — пабмед
Коулз А. Х., Туранов А.А., Годиньо BMDC, Эчеверрия Д., Альтерман Дж.Ф., Ру Л., Харасти Р.А., Хворова А., Аронин Н. 2017. 5′-винилфосфонат улучшает накопление в тканях и эффективность конъюгированных миРНК in vivo. Рез. нуклеиновых кислот 45: 7581–7592. 10.1093/нар/gkx507 — DOI — ЧВК — пабмед
Типы публикаций
термины MeSH
21
21
вещества
Повышение эффективности миРНК за счет химических модификаций нуклеотидных оснований на 5′-конце направляющей цепи миРНК
org/Person»> Фумикадзу Шинохара1,
Тайдзи Оаши1,
Тошимаса Харумото1,
Томоюки Нисикава1,
Юки Такаяма1,
Хикару Мияги1,
Юичи Такахаси1,
org/Person»> Такахиро Накаджима1,
Такаши Савада1,
Ясуо Кода1,
Асана Макино1,
Ацуко Сато1,
Каори Хамагуч2,
Мичихико Судзуки1,
org/Person»> Дзюнъитиро Ямамото1,
Юкихиде Томари2 и
Джун-Ичи Сайто1,3

¹ Кайова Кирин Ко., Лтд.;

² Токийский университет
↵* Соответствующий автор; электронная почта: jun.saito.su{at}kyowakirin.com
Abstract
Малые интерферирующие РНК (миРНК) можно использовать не только в качестве функциональных инструментов биологических исследований, но и в качестве терапевтических агентов. Для клинического применения миРНК в качестве лекарств использовались различные химические модификации для повышения активности миРНК. ожидается, что лекарственные препараты и дальнейшие химические модификации улучшат применение siРНК-терапевтических средств. Как 5′ азотистое основание направляющей цепи влияет на взаимодействие между siRNA и AGO2 и на активность расщепления мишени, структурную оптимизацию этого конкретного положения может быть полезной стратегией для улучшения активности siRNA. Здесь, используя in silico модель комплекса между доменом MID AGO2 человека и нуклеозидмонофосфатами мы провели скрининг и синтезировали оригинальный аналог, производный от аденина, 6-(3-(2-карбоксиэтил)фенил)пурин (6-mCEPh-пурин), который лучше, чем природные нуклеотидные основания, вписывается в домен MID. из АГО2. Введение аналога 6-mCEPh-пурина на 5′-конце направляющей цепи миРНК значительно усиливало действие мишени. нокдаун-активность как в культивируемых клеточных линиях, так и в животных моделях in vivo. Наши выводы могут помочь расширить стратегии рационального оптимизация активности миРНК посредством химических модификаций нуклеотидных оснований.
Аргонавт
РИСК
Сайленсинг РНК
химическая модификация
миРНК
Поступила в редакцию 27.10.2019 г.
Принято 5 ноября 2020 г.
Эта статья распространяется исключительно RNA Society в течение первых 12 месяцев после даты полной публикации (см. http://rnajournal.cshlp.org/site/misc/terms. xhtml). Через 12 месяцев он доступен по лицензии Creative Commons (Attribution-NonCommercial 4.0 International), как описано на http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/.
ПРИНЯТАЯ РУКОПИСЬ
Настоящая статья
Опубликовано заранее 11 ноября 2020 г., дои: 10.1261/РНК.073783.119 РНК 906:50 2020. Опубликовано издательством Cold Spring Harbour Laboratory Press для Общества РНК
.